饲料添加剂磷脂分析测定钼蓝比色法

饲料添加剂磷脂的分析测定是一个重要的质量控制环节，而钼蓝比色法是一种常用的测定磷脂含量的方法。以下是对钼蓝比色法测定饲料添加剂磷脂的详细阐述：

一、实验原理

钼蓝比色法的原理是将含磷脂的试样与氧化锌一起灼烧，使有机磷转变为无机磷，以磷酸盐的形式留在灰分中。随后，将灰分加酸溶解，使磷酸根离子与钼酸钠作用生成磷钼酸钠，遇硫酸联氨被还原成蓝色的络合物——钼蓝。这种蓝色的络合物与磷脂含量成正比，因此可以通过比色法测定其含量。

二、仪器和用具

进行钼蓝比色法测定时，所需的仪器和用具包括：

瓷坩锅或石英坩锅

紫外分光光度计

移液管（5ml、10ml）

电炉、高温炉

漏斗、容量瓶（100ml、500ml、1000ml）

表面皿、烧杯、量筒

恒温水浴锅

三、试剂

实验所需的试剂包括：

50%氢氧化钾溶液、盐酸、硫酸

氧化锌、滤纸

0.015%硫酸联氨溶液

2.5%钼酸钠稀硫酸溶液：量取140ml硫酸注入300ml水中，摇匀，冷却至室温，加入12.5g钼酸钠，溶解后加水至500ml，摇匀，静置24小时备用

磷标准溶液：称取无水的磷酸二氢钾0.4391g溶于1000ml水中作为1号液（含磷0.1mg/ml），吸取1号液10ml，加水稀释至100ml作为2号液（含磷0.01mg/ml），用于比色

四、操作方法

绘制标准曲线

取5只50ml比色管，分别加入磷标准2号液1、2、4、6、8ml，再分别加水至总体积为50ml（即分别加水9、8、6、4、2ml）。

向各管中加入0.015%硫酸联氨溶液8.0ml和2.5%钼酸钠稀硫酸溶液2.0ml，摇匀。

将比色管置于正在沸腾的水浴中加热10分钟，取出冷却至室温。

用水稀释至50ml充分摇匀，经10分钟后，用分光光度计在波长650nm下测定消光值。

以消光值为纵坐标，以磷的毫克数为横坐标绘制标准曲线。

制备被测液

饲料添加剂磷脂用坩锅称取试样约10g（准确至0.001g），加氧化锌0.5g。

先在电炉上加热炭化，然后送入550~600℃的高温炉中灼烧至灰化（白色），灼烧时间约2小时。

取出坩锅在干燥器中冷却至室温，用热盐酸（1:1）10ml溶解灰分，并加热微沸5分钟。

将溶解液过滤，注入100ml容量瓶中，用热水冲洗坩锅和滤纸。

待滤液冷却至室温后，用50%氢氧化钾溶液中和至出现浑浊，缓慢滴加盐酸使氢氧化锌沉淀全部溶解后，再滴加2滴盐酸。

最后用水稀释至刻度，摇匀。

比色

用移液管吸取被测液10ml注入50ml比色管中。

加入0.015%硫酸联氨8.0ml和2.5%钼酸钠稀硫酸溶液2.0ml，摇匀。

将比色管置于正在沸腾的水浴中加热10分钟，取出冷却至室温。

用水稀释至50ml充分摇匀，经10分钟后，用分光光度计在650nm下测定消光值。

五、结果计算

根据被测液的消光值，从标准曲线查得磷量（P），然后按公式计算磷脂含量：磷脂（%）=（P×V2/V1×26.31）/W，其中：P为标准曲线查得的磷量（mg），V2为样品灰化后稀释的体积（ml），V1为比色时所取的被测液体积（ml），26.31为每毫克磷相当于磷脂的毫克数，W为试样重量（g）。

六、注意事项

样品完全烧焦后，才放到高温炉中灰化。

用热蒸馏水冲洗坩埚时应少量多次，尽可能把样品冲洗干净。

硫酸联氨溶液会引起皮肤、眼睛、嗓子等器官发炎，损害心脏和肺，故操作时要小心谨慎。

综上所述，钼蓝比色法是一种准确、可靠的饲料添加剂磷脂分析方法，适用于各种含有磷脂的饲料添加剂的测定。通过严格遵循实验原理、操作方法以及注意事项，可以确保测定结果的准确性和可靠性。